總體DNA甲基化極易定量檢測試劑盒

總體DNA甲基化極易定量檢測試劑盒??

介紹?

產品特性： 總體DNA甲基化極易定量檢測試劑盒檢測全基因組DNA甲基含量時是非常 適合的.不論是從哺乳類動物,植物,**,**,病毒和培養細胞,**與冷凍的組織,石蠟包埋 組織,血漿/血清樣本,體液等樣本.此品尤其適合僅有少量樣品在**顯微捕獲了的解剖樣 品和胚胎。不論是單鏈DNA和雙鏈DNA，片段在200bp到全長都很適用。?

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DNA輸入量：? ?每次分析DNA的上樣量為20 - 200ng。**優DNA的輸入量為100 ng,在某些種屬中，組 織樣本間的甲基化的DNA含量一般都小于1的總DNA。?

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起始材料： ? ? 材料包括各種組織或細胞樣本如細胞培養瓶或微孔板培養的細胞、**和冷凍組織,石 蠟包埋組織、血漿/血清樣品,體液樣品等。?

產品概述： 總體 DNA 甲基化極易定量檢測試劑盒中含有定量檢測全基因組甲基化所必 需的所有試劑。在檢測實驗中，DNA被固定在一種有DNA吸附能力的孔上，甲基化的片段 會被捕獲劑以及檢測抗體識別，用酶標儀讀取在450 nm處的OD值來定量。甲基化的DNA的量與OD值成線性關系，可以通過本試劑盒提供的方程來計算兩種不同的甲基化DNA樣 品的相對甲基化狀態或者通過**曲線**定量5-mc。基于其工作原理和微孔板模式，本 試劑盒可以用于各種物種來源的多種樣品形式，包括培養的細胞、**和冷凍的組織、石蠟 包埋組織、血漿/血清樣品以及體液樣品

相關知識擴展了解：關于 5-hmC ? ? 5-hmC 是近年來在動物組織中發現的，由胞嘧啶修飾而來。5-hmC在表觀遺傳學上的功 能可能與5-甲基化胞嘧啶不同。盡管到現在為止還不確知其功能，有研究者猜測它在 調控基因的表達與關閉過程中起著重要的作用。5-mC的發現讓我們不得不重新評估DNA甲 基信息，也不得不監測人類的健康組織和病理組織之間5-mC相對分布的差異。在我公司的DNA羥甲基化定量檢測技術之前，我們還沒有發現任何直接的常規方法來檢測5- hmC,以及 區分5-hmC和5-mC。?

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5-hmC 和5-mC的區別? ?時下常用的DNA甲基化分析方法包括限制內切酶酶切和亞硫酸氫鹽后的定性定量分析 或MeDIP介導的MS-PCR和測序，這些技術都不適合用來檢測5-hmC，因為它與5-mC事實 上很難用這類方法區分開來。為了解決這個問題，我司特研制了DNA羥甲基化定量檢測試 劑盒。本試劑盒提供了一種很經濟的方法來檢測5-羥甲基化胞嘧啶，并且區分5-hmC, 5-mC,和C，使得研究者能夠重新評估他們的DNA甲基化信息，也能夠在新樣品中尋找DNA羥甲基化。? ?**近，一種新的修正的核苷酸被命名為：5-hmC,且在老鼠的大腦和胚胎干細胞中已經發 現。在1952年，5-hmC**次發現是在噬菌體內。在哺乳動物中，它是由甲基化胞嘧啶氧化 所產生的，這是一個通過T族酶和DNA甲基轉移酶蛋白介導的一個反應 。下面是胞嘧啶的甲 基化、羥甲基化形式：

? ? ?未甲基化DNA ? ? ? ? ?甲基化DNA ? ? ? ? ?羥甲基化DNA ? ?T-C-G-T-C-G-A-C-G ? ? T-mC-G-T-mC-G-A-mC-G ?T-hmC-G-T-hmC-G-A-hmC-G?

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試劑盒曾經對來自小鼠大腦和海拉細胞系的樣品成功地進行了 5-hmC 的定量，所得到 的結果與用HPLC和LC-MS的方法相當。通過使用本試劑盒，研究者們首次在正常人類腦部 組織和結腸組織中發現了高豐度的5-hmC。同時，研究結果還顯示，正常人類腦部組織和結 腸組織中5-hmC分別占總甲基化胞嘧啶的32和16。相反，在結 腸癌細胞系和宮頸癌細胞系中，5-hmC的比率很低，幾乎沒有。?

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? ? 一些核苷酸的修飾改變，5-羥甲基胞嘧啶，5-甲酰基胞嘧啶，5-羧基胞嘧啶，已經被發 現在人類和小鼠的組織以及胚胎干細胞中。在哺乳動物中，這些修飾的核苷酸可通過5-甲 基胞嘧啶的氧化反應得到，中間伴隨有TET酶家族介導的反應。?

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這條技術路線圖表明：胞嘧啶的不同存在形式在調節基因功能中發揮著關鍵的作用，其 中 DNA 甲基化的結構和模式尤為重要。 **和便利的檢測5-mC水平，對于DNA在不同的生理和病理過程中的變化，變得非常 重要，尤其是癌癥。基于色譜分析技術比如：HPLC和質譜分析法：TLC來檢測5-mC。但是， 這些方法耗時，通量低，高成本。為了解決這些問題，我們的技術團隊提供了一系列甲基化DNA定量檢測的方法來定量檢測5-mC或甲基化的DNA和更為深入的改變甲基化DNA實驗， 優化出了：總體DNA甲基化極易定量檢測試劑盒。?

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本試劑盒有以下優點和特性： l 快速：減少的步驟，整個操作僅需要 2小時； l 穩定性：優化的試劑盒組分，允許在做復孔時，有更大的“觸發信號”，盡量減少變化；

?l 方便性：固定的低背景噪音，從而**了DNA變性和板孔的限定性； l 靈敏度：檢測下限低至0.05的甲基化DNA，輸入量在100ng； l 特異性：**特異結合5-mC，在復孔的濃度范圍內，對于未甲基化的胞嘧啶和羥甲基 的胞嘧啶無特異性反應，僅對甲基化DNA進行高度專一的檢測;l 通用型：陽性與陰性對照，對于任何種屬的甲基化DNA狀態進行定量檢測是非常理想 的； l **性：**的陽性對照可以得到**曲線，可以與HPLC-MS相媲美，用時短，效率 高，。 l 靈活性：微孔板的設計使實驗更靈活，無論對于手動還是高通量分析簡單、 可信和檢測實驗條件恒始終如一。?

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注：基于同一樣本分 2 份來測定。?

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